制備微生物檢測培養基細節問題

　　制備微生物檢測培養基細節問題
　　一、稱取
　　用度1/100的電子天平稱取培養基所需藥品。先根據配方計算出配制一定量培養基所需各種成分藥品的量，然后用天平準確稱取。稱量時用稱量紙折疊成簸箕狀盛放藥品。稱量紙折疊方法如圖所示。
　　二、溶化
　　培養基放入燒杯或搪瓷缸中，慢慢加入少量所需水，邊加入邊用玻棒攪拌。如果培養基中不含有瓊脂，培養基不需要加熱;如果含有瓊脂，則需要用本生燈或電磁爐加熱煮沸，*溶解后，再補齊所需水，并攪拌均勻(如圖3所示)。如果配制的培養基量很大，可用不銹鋼鍋加熱溶化，可先用溫水加熱并隨時攪動，防止焦化，如有焦化現象，配制的培養基就不能使用，要重新配制。
　　配制培養基時不可用銅或鐵的容器溶化，因銅或鐵制容器可能會使培養基中的銅和鐵的含量超標，影響實驗(培養基中銅含量大于0.3mg/L，細菌不宜生長，鐵含量超過0.14mg/L，妨礙細菌產毒素)。對容易發生反應，產生沉淀的藥品，要分開溶解，后面加入培養基，如磷酸氫二鉀和硫酸鎂。
　　三、調pH
　　雖然培養基中含有緩沖物質成分，能使培養基的pH盡可能的保持在要求的范圍內，但是配出的培養基若不符合要求，就要進行必要的調整。如果有已校準pH計，可用pH計，如果沒有，可用精密的pH試紙，再根據需要用1 mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸(微調可用0.1氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸)調制所需的pH。培基的pH一般為7.4～7.6，也有酸性或堿性的。用氫氧化鈉調整的需要高壓的培養基，在調整pH時要調至高出所需0.1個～0.2個單位，因用氫氧化鈉調整時，高壓后，培養基的pH要降低0.1~0.2。如培養基中含有碳酸鈣成分，可不pH。
　　四、過濾
　　配成的培養基，若無特殊要求，可省略此步。若有沉淀或渾濁.需要澄清的.液體培養基可用油紙過濾。而固體培養基可用中間夾一薄層脫脂棉的雙層紗布過濾。如果過濾法還不能達到澄清的要求，則可用蛋清澄清法，即培養基加熱冷卻到50~60℃，裝入三角瓶內(不超過容量的二分之一)，按1000mL加人1個～2個雞蛋的蛋清，用力搖晃3-5min，高壓蒸汽121℃、20min，取出趁熱過濾即可。
　　五、分裝
　　配制好的培養基根據不同的用途分裝在三角瓶、試管等容器中，分裝試管，如果試管量很大，可用自動分液器，如果試管量少，可用漏斗分裝。分裝量不超過容器容積的三分之二。三角瓶以不超過容積的二分之一為宜;瓊脂斜面以不超過試管長度的五分之一為宜，后，擺成的斜面為培養基量的三分之一，底層為三分之二的量為宜;半固體瓊脂分裝量為試管長度的三分之一;用來接種或保菌的高層瓊脂，分裝量為試管長度的四分之一或三分之一，用來接種厭氧菌的要達到三分之二;瓊脂平板，內徑為90mm的以13mL~15 mL為宜，內徑70mm的平板為8mL~10 mL，制成的瓊脂平板若表面水分較多，可將平板倒扣，放置在37℃培養箱內30min，干燥后再用。每批培養基應另外分裝一小玻璃瓶(約20mL)與該批培養基同時，為測定該批培養基后面為pH。
　　六、
　　分裝好的培養基應立即進行的方法種類如下：
　　1. 高壓蒸汽法
　　大多耐熱培養基都可用此法，小量分裝時，用121℃，15min;量大時，用121℃，30min;含糖類的培養基只能113~115℃，15min，避免糖類遭破壞。
　　2.煮沸法
　　對含有不耐高溫物質的培養基，可使用此方法。
　　3.過濾
　　以過濾的方法，用無菌操作技術，定量加入培養基。血液、抗生素可用無菌操作技術抽取，加入冷卻到50℃左右的培養基中。培養基含有不耐熱的物質時，可用此法。
　　對LST培養基進行時，有時發酵管內會有氣泡。為防止發酵管內產生氣泡，可以采取以下幾項措施：
　　1. 小倒管浸滿培養基(不留氣泡)后再加入到盛LST的試管中。
　　2.鍋關閉放氣閥前，將鍋內氣體排干凈。
　　3.試管塞不要塞得太緊(使用硅膠塞的時候)，勿使用橡皮塞。
　　4不要過早打開鍋，要等鍋內氣壓和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再打開鍋。
　　如果以上情況都做到還有氣泡，可用水做培養基組的對照試驗，若培養基組有氣泡，而對照組沒有氣泡可確定是培養基自身的原因。
　　七、倒平板
　　融化的培養基冷卻到50℃后，倒入無菌干燥的培養皿中。培養基的溫度不能過高，否則容易在培養皿的內蓋上形成太多的冷凝水;溫度太低，培養基又容易凝固成塊，無法制成平板。倒平板時，應在靠近酒精燈火焰進行，以免外界的雜菌落入平板內，左手拿培養皿，右手拿三角瓶的底部，用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下，灼燒瓶口，用大拇指和食指把培養皿蓋打開一條縫，至瓶口剛好伸入，倒入培養基，以鋪滿底為限，不超過培養皿高度的三分之一，迅速蓋好蓋，放在桌面上，輕輕地轉動培養皿，使培養基分布均勻，冷凝后即可。
　　八、擺斜面
　　裝在試管中的瓊脂培養基，在完成后，趁熱立即擺放在木棒(或玻璃棒)上，并成適當的斜度，冷卻后，瓊脂凝固即成斜面。斜面長度不用超過試管二分之一。
　　九、質量檢查
　　培養基后仔細檢查一遍，發現有破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染，都要丟棄，不能再用。并測定其后面為pH。還需進行無菌檢查和效果檢查。無菌檢查是將后的培養基取1管(瓶)~2管(瓶)，37℃恒溫培養1d～2d，確定無雜菌生長;效果檢查是用標準菌株接種在相關的培養基上檢查檢查菌的生長、形態及生化情況，與已知情況相符。兩種情況都合格，配制的培養基方可使用。